什么是HPLC？
指高性能液晶圖形y。 輸液泵、注射器(自動取樣器)、色譜柱烤箱，檢測器等構(gòu)成。 這是一種按成分分離樣品的技術(shù)，可以確認(定性)什么樣的東西、裝了多少(定量)，并回收分離出的成分(分選色譜法)的正平方根。
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水泵
為了用自動取樣器注入樣品，用色譜柱分離后用檢測器進行檢測，流動相需要流動的泵。 泵有以下3種泵。
等靜壓泵
在保持流動相組成一定的狀態(tài)下使用。 GPC分析時使用的送液泵數(shù)量為1臺。
低壓梯度泵
在送液泵前設(shè)置電磁閥等，將多個流動相混合。 由于在送液泵的跟前混合流動相(在混合時沒有施加泵的壓力的意義上)，低壓梯度我叫它泵。 1臺送液泵就可以進行梯度。 導(dǎo)入時的初期成本得到控制，因為只有一臺送液泵，所以運行成本也得以控制。
高壓梯度泵
每混合一個流動相需要送液泵，2液梯度時需要2臺泵，4液梯度時需要4臺泵。 根據(jù)各流動相的濃度比率調(diào)整流量，供液后混合。 由于在送液后混合了流動相(在混合時施加了泵的壓力的意義上)，高壓瞬變我叫它泵。 格蘭特的延遲會減少。 因為需要多臺泵，所以導(dǎo)入時的成本會變高。
低壓梯度
高壓瞬變
檢測器
檢測分離成分的模塊。 根據(jù)樣品的種類區(qū)分使用檢測器。 例如，如果是有UV吸收的樣品，可以用UV-VIS檢測器或PDA檢測器進行檢測。 檢測器的種類有以下幾種。
UV-VIS探測器
從紫外可見光區(qū)域的吸收波長的樣品用1波長的吸光度進行檢測。 用于檢測具有芳香環(huán)或雙鍵的有機化合物。
PDA檢測器
用多波長吸光度檢測具有紫外至可見區(qū)域吸收波長的樣品。 UV-VIS檢測器僅限于設(shè)定的1波長(或2波長)的測量，而PDA檢測器可以同時測量某一定范圍的色譜圖，因此可以獲取時間、強度、波長的三維數(shù)據(jù)。 是討論分析條件時有效的檢測器。
RI檢測器
檢測折射率。 糖、酒精等幾乎所有的樣品都可以檢測出來，但缺點是靈敏度低。 多用于GPC分析。 梯度分析是不可能的等軸測使用分析。
熒光探測器
檢測吸收激發(fā)波長的光而發(fā)出的光(熒光)。 不發(fā)熒光的樣品可以通過衍生化進行檢測。 可以以比UV-VIS檢測器高50~200倍左右的靈敏度進行分析。 用于氨基酸、維生素和類固醇等的分析。
NQAD檢測器
使流動相軟化，使水分凝結(jié)在殘留的氣溶膠傳播狀態(tài)的微粒子上，用激光進行檢測。 可以檢測非易失性半揮發(fā)性物質(zhì)。 可以進行梯度分析，可以以高靈敏度進行檢測。
日立5430二極管陣列探測器
日立5440熒光探測器
HPLC的檢測器除了上述以外，質(zhì)譜計來刪除它。 質(zhì)譜分析是將分子離子化，那個m/z這是一種可以通過測量來測量分子質(zhì)量的裝置。 作為縮寫有時會記載為MS，讀作MAS，但日本質(zhì)量分析學(xué)會推薦使用mes的稱呼。 質(zhì)譜計中具有代表性的東西有以下幾種。
四極質(zhì)譜儀
分離質(zhì)量電荷比的離子并分析質(zhì)量。 由4根棒平行捆扎而成，也稱為四極。 對置的桿賦予相同的電位，對相鄰的桿賦予相反的電位。 另外，桿中流過直流和高頻的交流。 調(diào)整4根棒的電壓送入離子后，只有一定范圍的質(zhì)量電荷比的離子可以穩(wěn)定地通過。 像這樣四極質(zhì)譜儀通過只提取特定的離子(SIM)可以高靈敏度地定量。 另外使直流和高頻交流電壓連續(xù)變化掃描分析で質(zhì)譜也可以獲得。
三重四極質(zhì)譜儀
與四極型質(zhì)譜儀相比，這是一種可以更高靈敏度定量的質(zhì)譜儀。 2個四極隔著碰撞室(碰撞池)串聯(lián)連接而成。三重四極質(zhì)譜儀是，前驅(qū)離子用碰撞細胞破壞產(chǎn)品離子格式-單元格MRM通過獲取數(shù)據(jù)，可以得到更高靈敏度的結(jié)果。 因為使用四極作為碰撞室(碰撞池)內(nèi)的離子導(dǎo)向器，所以被稱為三四極。 目前“三重四極"并不是嚴(yán)格表達裝置構(gòu)成的術(shù)語，因此作為更廣義的術(shù)語，也有串聯(lián)質(zhì)譜儀的說法。
飛行時間質(zhì)譜儀
這是一種可以根據(jù)離子飛行時間進行定性的質(zhì)譜儀。 測量離子以一定的高能量在飛行管內(nèi)加速，到達檢測器的時間。 質(zhì)量數(shù)小的快，質(zhì)量數(shù)大的慢到達檢測器，通過測量該時間可以得到小數(shù)點后4位的精密質(zhì)量。 使用該精密質(zhì)量可以推測化合物的結(jié)構(gòu)。 也有通過在前級組合四極，可以進行定量和定性兩方面分析的混合質(zhì)譜儀( Q-Tof系統(tǒng))。
Xevo TQ Absolute (串聯(lián)四極質(zhì)譜儀)
Xevo G3 Q-Tof (飛行時間質(zhì)譜儀）
關(guān)于流動相和固定相
流動相是用于注入樣品，在色譜柱中進行成分分離，并將該成分輸送到檢測器的液體。 主要使用有機溶劑和水。 正相使用氯仿、二氯甲烷、*，反相使用水、甲醇、乙腈等。
另外，固定相指色譜柱，是將樣品按成分分離的地方。
色譜柱有很多種，根據(jù)樣品的極性、pH、官能團的種類來區(qū)分使用。 作為代表性的列ODS列( Octa Decyl Silyl Column別名C18列)。反相色譜法在中被用作第一選擇的色譜柱。
固定相(柱)
流動相
分離方法
HPLC有各種分離方法。 需要根據(jù)樣品的特性改變分離方法。 極性高樣品時為反相色譜，極性低的樣品時為反相色譜順相色譜法聚合物的分析使用凝膠滲透色譜等。 分別進行說明。
反相色譜法
樣品的疏水性是根據(jù)的差異來區(qū)分的分離方法。 是HPLC中的手法。 固定相中含有聚合物等弱極性的填充劑來修改選定線條的屬性。 作為代表性的東西，ODS柱經(jīng)常被使用。 流動相使用甲醇、乙腈作為溶出力強的溶劑，水作為溶出力弱的溶劑。
順相色譜法
樣品的親水性是根據(jù)的差異來區(qū)分的分離方法。 固定相使用硅膠等高極性的填充劑。 流動相中使用氯仿、乙酸乙酯作為溶出力強的溶劑，使用己烷等作為溶出力弱的溶劑。 順相色譜的流動相中含有的極少量的水等可能會對分析結(jié)果產(chǎn)生較大的影響。
凝膠滲透色譜( GPC )
這是Gel Permeation Chromatography的縮寫，是確認分子量分布的分離方法，主要用于化學(xué)工業(yè)領(lǐng)域的聚合物分析等。 流動相使用能很好溶解樣品的溶劑。 固定相中有樣品分子的大小泊爾使用大小的柱。 GPC分析中基本上沒有標(biāo)準(zhǔn)品，所以主要使用聚苯乙烯等作為標(biāo)準(zhǔn)品，用聚苯乙烯換算來數(shù)值化分子量。
| 分離模式 | 固定相 | 流動相 | 特征 |
|---|
| 順相 | 硅膠等 | 六氯甲烷等 | 脂溶性成分的分離 |
| 反相 | ODS(C18 )等 | 水甲醇等 | 常用的手法 |
| GPC | 聚合物等 | THF甲苯等 | 分子量分布測定 |
分離方法的特長
分析結(jié)果
用HPLC分析的結(jié)果用如下色譜圖表示。 縱軸為峰值強度，橫軸為橫軸保持時間顯示。 利用該峰強度和保持時間進行定量及定性。
定量
使用標(biāo)準(zhǔn)品改變濃度進行分析，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 分析樣品時，根據(jù)峰面積值位于標(biāo)準(zhǔn)曲線的哪個位置，可以相對求出濃度。
色譜圖
標(biāo)準(zhǔn)曲線
定性
通過比較標(biāo)準(zhǔn)樣品中各組分的保留時間和樣品色譜圖的保留時間進行定性。
HPLC引進領(lǐng)域
HPLC在所有領(lǐng)域都有使用。
制藥:在藥品的質(zhì)量管理中，必須使用HPLC進行業(yè)務(wù)。
食品:用于食品中的成分分析(糖或氨基酸)。
化學(xué)工業(yè): GPC用于聚合物等的合成確認。
更新時間：2023-08-24 
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